技术 | 常用切片技术
2023-07-13
摘要
众所周知，在医药研究尤其是热门的癌症研究中，需要用到许多工具和材料包括待研究的组织或细胞标本。标本可用于检查细胞的形状和结构（形态），疾病状态，细胞内和细胞间的通讯，于是，怎样从活检组织的中取得。由于大多数生物材料既易碎又易腐烂，因此必须注意确保正确制备和保存它们。
本文中，将着眼于FFPE与冷冻组织的关系进行探讨。今天有两种主要的组织制备方法。几十年来，组织已被福尔马林（又称甲醛）浸透，然后包埋在石蜡块中（称为福尔马林固定石蜡包埋或FFPE组织）。随着可靠的超低温冷冻机和大量液氮供应的出现，冷冻组织作为长期储存的第二种手段已变得可行。这两种方法各有优缺点。以下是这些优点和缺点的比较两种保存方法。
FFPE
福尔马林固定石蜡包埋组织
福尔马林固定石蜡包埋的组织是储存标本的最常见方法，数十年来，医院病理学家一直在使用FFPE组织。从患者身上获取的活检样本时，将这些材料中的一些处理保存，以备研究使用——有时在患者的治疗过程中会参考以前的病生理组织。
还有一些研究人员保存人类捐赠的组织或动物身上收集组织以备研究所需。
以FFEP这些档案库称为“生物库”，可以由大学和医院开发，也可以由为研究社区服务的公司出于商业目的创建。建立档案库可以为后续研究提供有力支持。
由于建库涵盖的时间线很长，因此它们可以提供历史资料，并且可以输出大量数据。由于FFPE切片可以室温储藏，因此创建一个可长期保持稳定的大样本成本很低。
福尔马林和蜡保留了组织中细胞内部和细胞之间的脆弱结构，这使得关注细胞和组织形态的科学家得以使用FFPE组织进行科研工作，如病理学家可以通过研究活检组织的FFEP切片作为癌症的诊断依据。
FFPE处理同时可以保存组织中的蛋白质也得以保存，而不仅仅是在显微镜下可见的结构。组织学家可以使用荧光标记的抗体（或通过其他方式标记的抗体）特异性结合某些蛋白质，以验证它们是否存在于组织内的某些细胞中，以及这些蛋白质在患病组织与健康组织中的位置和数量是否不同。该方法称为免疫组织化学法（IHC）。由于FFPE是一种应用历史较久且成熟的组织存储方法，所以病理学家习惯于检查组织活检并运用活检结果进行诊断。
FFPE组织的缺点
福尔马林易挥发，有毒，而且气味难闻。大多数石蜡包埋和固定程序也很费力且费时。另外，在保留蛋白质的同时，蛋白质变性所以不再具有生物活性。所以切片中变形的达标可能与某些抗体无法结合（比如天然的该蛋白的抗体）。这会限制切片在如IHC研究中的价值，因此切片无法用于生化分析。
另一个问题是FFPE组织中的核酸（DNA和RNA）不能维持生物活性状态。尽管可以从储存的石蜡切片组织中分离核酸，但由于信息缺失，这种核酸的用途十分局限。
因此，FFPE组织可能并不适合所有分子遗传学分析。而且大部分FFPE流程尚未标准化，不能保证实验样品的处理是一致的。非标准化的制备方法会严重影响从中获得的结果——特别是在分子遗传分析的实验中。可以进行一些分子分析，但是当使用FFPE方法保存组织时会损失很多。
冰冻切片组织
冰冻方法——处理样本的新手段
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