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技术分享全面的抗体保存指南

发布时间:2021-06-30     浏览次数 :0

NOTE:请务必查看关于您抗体的具体数据,获取保存建议。我们不对保存不当的抗体负任何责任。如果保存和处理得当,大部分抗体的活性都可保留数月,甚至若干年。

保存温度

对于许多抗体而言,分装为小份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的保存条件。分装抗体可以最大限度减少冻融对抗体造成的损坏,还可避免多次从同一管中移取抗体而引入污染。分装后抗体只可冻融一次,如有剩余,应保存在 4 ℃ 下。

当您收到定制的抗体后,请以 10,000 × g 离心 20 秒,沉降滞留在管盖螺纹中的溶液,然后分装抗体并将其转移至低蛋白质结合的微量离心管中。分装抗体的量取决于您在实验中常用的量。分装抗体时,每管应不少于 10 μL;分装抗体量越少,浓度就越容易受到蒸发以及储存样品管表面吸附的影响。

在大部分情况下,可在收到抗体之后立即将其保存于 4 ℃ 下,可保存 1 至 2 周。遵循数据表上的保存建议非常重要。

特例

切勿冻存酶偶联抗体,而应将其保存在 4 ℃ 下。冻融不仅会影响抗体的结合能力,还会降低酶活性。

偶联抗体(无论是偶联有荧光染料、酶还是生物素)应保存在深色样品瓶中或用锡箔纸包裹样品瓶。暴露于光下会影响偶联物的活性。荧光偶联物尤其容易发生光致漂白,因此在实验各阶段都应避光保存。

IgG3 同型抗体的独特之处在于其解冻后容易形成聚集体,因此应始终保存在 4 ℃ 下。

腹水液中可能含有蛋白酶,因此收到后应尽快冻存。

污染

为了防止微生物污染,可将叠氮化钠加入抗体制备物中,叠氮化钠的最终浓度为 0.02%(w/v)。一般运送至实验室的抗体中都含有这种保护剂,其浓度范围为 0.02%-0.05%。保存缓冲液部分的详细数据会对此项进行说明。

不使用叠氮化钠的情况

如果要用抗体对活细胞进行染色或处理,或者要用抗体进行体内研究,请务必使用不含叠氮化钠的制备物。这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用:它会阻断细胞色素电子传递系统。

叠氮化钠会干扰涉及胺基的所有偶联反应,因此必须在进行偶联反应之前将其去除。完成偶联反应之后,可使用叠氮化钠保存抗体。另一种可用的抗菌剂是 0.01% 硫柳汞钠(硫柳汞),这种物质不含伯胺。

抗体溶液中的叠氮化钠可通过渗析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da(IgM 约为600,000 Da),叠氮化钠的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微渗析装置可使叠氮化物顺利扩散出去,而抗体得以保留。

渗析过程在烧杯中(置于磁力搅拌器上,温度保持 4 ℃)进行,每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS,搅拌渗析装置 6小时。更换 PBS 两次,每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能,所有材料都应灭菌,并且应在无菌条件下处理所得制备物。

冻融损坏

反复冻融可能使抗体变性,导致抗体形成聚集体,从而降低其结合能力。

对大部分抗体而言,在 -20 ℃ 下保存就已足够;在 -80 ℃ 下保存并无明显优势。应避免使用无霜冰箱,因为此类冰箱的冻融循环(用于减少霜的形成)正是保存此类抗体需要避免的。出于相同的原因,应将抗体样品瓶放在冰箱中温度波动最小的区域,例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱门架上。

有些研究人员向抗体中加入冷冻保护剂甘油(最终浓度为 50%)以防止冻融损坏;甘油可将冷凝点降至 -20 ℃ 以下。虽然这种方法可用于多种抗体,不建议在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液,因为该温度低于甘油的冷凝点。请注意,甘油可能会被细菌污染。如果加入了甘油或任何冷冻保护剂,应当小心操作,确保获得无菌制备物。

蛋白质浓度和稳定性

将抗体稀释至工作浓度后,在 4 ℃ 下保存不得超过一天。一般而言,以高浓度保存的蛋白质更不易降解,理想浓度是 1 mg/mL 或更高。这就是将蛋白质(如 BSA)作为稳定剂加入抗体溶液的基本原理。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂,因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争,降低偶联效率。

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