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分享一下做十年的重组蛋白表达感受吧

发布时间:2021-06-30     浏览次数 :0

从学校毕业后就进入一家公司做重组蛋白表达工作,猛然间才发现,原来2008已经是十年前的事情了,自己也从原核细胞表达平台调到了HEK293稳定株及瞬时表达平台,期间还在杆状病毒-昆虫细胞表达平台、酵母细胞表达平台待过一段时间。可以说这十年时间,我的青春奉献给了重组蛋白的不同表达平台,所以接下来我就说一说这些平台的故事吧。

原核细胞表达平台是最常用的表达系统,经济实惠,可以表达一些无糖基化或者经过简单修饰的重组蛋白,但是有些特殊的表达载体难以与宿主菌相容,使得目的蛋白无法表达,还有就是经常出现包涵体,表达蛋白不可溶,在纯化过程中容易造成重组蛋白失活。当然为了克服这些问题,我们组要经常进行表达载体与菌株相容性测试、诱导表达条件优化、复性等试验,经过这十年的优化,我们积累了大量的经验,建立了完整的载体与最佳菌株相容库。我们还建立了2000L的大肠杆菌生产车间,可以实现工业化生产。

规模化的原核表达系统

CHO稳定株和HEK293瞬时表达平台的出现克服了翻译后修饰蛋白表达的问题。此平台表达的蛋白具备折叠和修饰的功能,高度人源化,可以用于结构、功能分析。表达量明显提高,使得大规模表达更加容易。稳定及瞬时表达平台,从细胞转染、筛选到分离,整个操作过程在无血清培养条件下完成,可以实现翻译后特殊修饰,形成多聚体,在多肽内或多肽间形成二硫键,或者进行特殊的糖基化。我们现在每天进行小规模的蛋白表达可以近千次,从100ml的细胞筛选到1L的表达条件构建不等。我们建立的高效稳定株、细胞系,可以进行大规模生产,从2L到200L培养体系的稳定运行,cGMP车间的100L到1000L的稳定表达。

哺乳动物细胞表达系统

杆状病毒-昆虫细胞表达平台操作流程简单、表达水平高,可以表达翻译后修饰的重组蛋白,可用于表达多种病毒蛋白、激酶蛋白等,尤其擅长进行定位于胞内、核内的重组蛋白表达。我们优化了sf9、sf21昆虫细胞的培养条件,自主研发了一套培养基,有效的提高重组蛋白表达量。

酵母细胞表达平台以毕赤酵母为表达载体,融合了原核表达与真核表达平台的优点,可以表达糖基化蛋白,表达量高且稳定。此平台可以表达一些在其他平台无法表达的蛋白。

多种细胞表达平台

十年的蛋白表达经验,从原核到真核,从最初的瓶瓶罐罐到现在的不同规格的反应器,可以说我见证了重组蛋白从难表达到规模化制备的过程。

看看我现在用的这些设备怎么样?他们可以用于蛋白浓度测定、吸收光谱检测、N末端序列测定、质谱分析等蛋白性质、功能等分析测定。

重组表达蛋白检测设备

大家如果在重组蛋白方面有什么想法,可以在下方和小编一起讨论。

  • 重组蛋白表达

    具备高效的哺乳动物细胞表达系统和丰富的蛋白表达经验,可实现重组蛋白高质量表达与制备。针对表达难度大且生物活性敏感的蛋白,可实现精准设计和优化表达策略,表达不成功不收费。

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  • 高通量鼠单抗筛选

    思格生物建立了高通量的鼠单抗筛选技术平台,单次筛选即可获得100~500株ELISA强阳性单克隆抗体,充分满足科研用抗体制备、单抗药物高通量筛选的需求,欢迎致电咨询与合作。

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  • 纳米抗体筛选

    具备鲨鱼免疫、羊驼免疫和骆驼免疫场所和基地,建立了噬菌体展示和哺乳动物细胞展示联合的高通量纳米抗体筛选平台,为客户提供从抗原制备、抗体筛选和抗体亲和力评估的抗体开发服务。

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  • 稳转细胞构建

    我们开发了非病毒依赖的稳转细胞构建技术,可实现大片段(20kb)、多基因(3-5个基因)在细胞基因组上的稳定整合,最快30天获得稳转株,为客户提供性价比极高的稳转细胞构建服务。

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